Tip:
Highlight text to annotate it
X
In Phase vier, werden wir unsere erste Vernetzung Proteine DNA umkehren, gefolgt von
Reinigung der DNA. Beginnen Sie, indem jede IP-Probe sowie der Eingang Probe
nicht durch die vorhergehenden IP *** und fügen 8 Mikroliter von 5 molaren Natrium-
chloride an die 200 Mikroliter-Proben durch Vortexen folgte.
Inkubation bei 95 Grad Celsius für 15 Minuten. Um jede Probe zu reinigen wir ein DNA-bindendes Silica-Säulen nach verwenden
zu den Anweisungen des Herstellers. Zuerst fügen Sie jede Probe für den richtigen Mengen
DNA-Bindungspuffer in Wirbel, dann übertragen jede Probe auf eine Säule innerhalb eines platziert
Sammelröhrchen. Zentrifugieren der Säulen bei 15.000 g für 1 Minute.
Verwerfen Sie den Durchfluss durch aus dem Sammelröhrchen und fügen DNA Waschpuffer jeder Spalte.
Zentrifuge der Säulen bei 15000g für eine Minute. Verwerfen Sie den Durchfluss durch aus dem Sammelröhrchen
und drehen Sie die leeren Spalten 15000g für zwei Minuten, um sicherzustellen, dass sie vollständig trocken sind.
Entsorgen Sie die alte Sammelröhrchen und legen die Reinigung Säule in ein neues sauberes Röhrchen.
Dann werden 50 Mikroliter der DNA elusion Puffer direkt auf die Membran in der Spalte.
Lassen Sie für eine Minute sitzen, dann eine Endschleudern bei 15000g für 1 Minute.
Entsorgen Sie die Reinkolonne und speichern Sie die gereinigte DNA bei -20 Grad Celsius bis bereit für die letzte Phase.