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In Tag zwei unserer ICC Verfahren fügen wir unserer sekundären Antikörper, führen
eine optionale doppelte Kennzeichnung und Kernfärbung Schritt
montieren unsere Deckgläser Dias und Abrufen von Bildern unserer Antikörper mit
ein Fluoreszenzmikroskop.
Erste
wir absaugen Primärantikörper-Lösung folgender durch Waschen der Zellen
dreimal mit PBST für jeweils fünf Minuten.
Weiter bereitet die floraform konjugierten sekundären Antikörper, der an binden
der primäre Antikörper.
Verdünnen Sie die sekundäre Blockpuffer
an die empfohlene Verdünnung auf dem Datenblatt angegeben
und bei Raumtemperatur für eine Stunde inkubiert.
Abdecken der Platten mit Folie verhindert empfindlichen Farbstoffe aus entwürdigend.
Absaugen die sekundäre Antikörperlösung durch Waschen der Zellen verfolgt
dreimal mit PBST
für fünf Minuten.
Als optionaler Schritt eine getrennte Primär-und Sekundär-Paar verwendet werden
ein zweites Epitop mit einem anderen Stockwerk für sie zu visualisieren.
Zusätzlich können DNA-bindende Farbstoffe wie DAPI ohne aufgebracht werden
Sekundärantikörper.
Siehe das vollständige schriftliche Novus Protokoll für Anleitungen zu verdoppeln und
Dreifach-Label.
Deckgläser sind nun bereit, auf Objektträgern montiert werden.
Nehmen Sie ein sauberes Rutsche und einen Tropfen des antifade Eindeckmedium durch langsames
Wählen Sie den Kolben der Pipette.
Entfernen Sie vorsichtig ein Deckgläschen aus dem Brunnen,
damit überschüssiges waschen, abtropfen
und legen Sie die Zellen nach unten auf die Folie.
Klare Nagellack kann verwendet werden, um das Deckglas versiegeln und verhindern, dass es zu
Austrocknen.
Dias können nun unter dem Mikroskop sichtbar gemacht oder bei -20
oder 4 Grad Celsius in einem dunklen schiebeschachtel oder Dia Buch.
Die Begrenzung der Höhe der Zeit jede Folie wird auf die Mikroskops Licht ausgesetzt wird aide
in Verlängerung der fluoreszierenden Signals
und verhindern photo Bleichen.